科捷分享丨液相色譜柱安裝與使用說明
HPLC剖析是體系的作業，每個環節都很重要；看似簡略的環節，反而簡單疏忽，引起整個試驗的成果偏差，因而養成杰出的習氣是很重要的。色譜柱是色譜體系的心臟，液相色譜柱的正確裝置與運用，是色譜作業的要害；也是獲得正確牢靠的試驗數據的必經之路。
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運用儀器:??? LC-600A液相色譜儀
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一·液相色譜柱的裝置
1?????????液相色譜柱的結構：
a．空柱由柱接頭柱管及濾片拼裝而成
柱接頭選用低死體積結構，柱接頭是兩頭螺紋組件，一端是為7/16英才外螺紋，另一端是3/16英才的內螺紋（國內外已規范化）。7/16英才外螺紋與1/4英寸柱管（￠6.35mm）銜接，中心放置壓環用于密封。3/16英才的內螺紋與1/16英才（￠1.57mm）的銜接收銜接，之間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量削減柱外死體積，在裝置色譜柱時，用￠1.57mm銜接收經過空心螺釘壓環后要盡量插到底，然后在擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘揉捏變形后緊箍在銜接收上（銜接收經過壓環后顯露的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺度。
在兩頭柱接頭內，柱管兩頭各放置一片不銹鋼濾片（或濾網），用于封堵柱填料不被活動相沖出柱外流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質，能耐受一般的溶劑效果。但含氯化物的溶劑對其有必定的腐蝕性，故運用時要留意，柱及銜接收內不能長期存留此類溶劑，以避免腐蝕。
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b．?柱填料：
液相色譜柱的別離效果是在填料和活動相之間進行的，柱子的分類是依據填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為填料。依據外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10um的范圍內。另一類正相填料是硅膠外表鍵合—CN，—NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：首要是以硅膠為基質，在其外表鍵合十八烷基官能團（ODS）的非極性填料。也有無定型和球型之分。常用的其他反相填料還有鍵合C8，C4，C2，苯基等，其顆粒直徑在3-10um之間。
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2?????????色譜柱的裝置
a．?拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型，尺度，出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
b．?擰下柱兩頭的密封堵頭放回包裝盒備用。
c．?按柱管上標明的活動相流向，將色譜柱的入口端經過銜接收與進樣閥出口銜接（如條件允許，建議在柱前運用維護柱）；柱的出口與檢測器銜接。銜接收是外徑為.57mm、內徑為0.1mm-0.3mm的不銹鋼管。銜接收的兩頭均有空心螺釘及密封用壓環。在接收時必定要設法下降柱外死體積。銜接收經過空心螺釘、壓環后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動停止，再用扳手持續順時針擰1/4-1/2圈，牢記不要用力太大。如色譜柱經過活動相加壓后有漏夜現象，請用扳手順時針擰1/4圈，直至不漏夜停止。
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二·液相色譜柱的運用：
色譜柱在運用前，進行的柱的功用測驗，并將成果保存起來，作為今后評價柱功用變化的參考。但要留意：柱功用或許因為所運用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外做柱功用測驗時是依照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測驗所運用的條件是*條件），只要這樣測驗的成果才有可比性。
1?????????樣品的前處理：
a．?運用活動相溶解樣品。
b．?運用預處理柱除掉樣品中的強極性或與柱填料發生不可逆吸附的雜質。
c．?運用0.45um的過濾膜除掉微粒雜質。
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2?????????活動相的裝備：
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質量交流而達到別離的意圖，因而要求活動相具有以下的特色：
a．?活動相對樣品具有必定的溶解能力，保證樣品組分不會沉積在柱中（或長期保留在柱中）。
b．?活動相具有必定的惰性，與樣品不發生化學反應（特殊情況在外）。
c．?活動相的黏度要盡量的小，以便在運用較長的剖析柱時能得到好的別離效果；同時下降柱壓降，延伸液壓泵的運用壽命（可運轉提高溫度的辦法下降活動相的黏度）。
d．?活動相的化學性質要與運用的檢測器相適應。如用UV檢測器，運用對紫外吸收較低的溶劑制造。
e．?活動相的沸點不要太低，擔任簡單發生氣泡，導致試驗無法進行。
f．???在活動相裝備好后，必定進行脫氣。除掉溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以避免活動相中的微量氧與樣品發生效果。
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3?????????活動相流速的挑選：
因柱效是柱中活動相線性流速的函數，運用不同的流速可得到不同的柱效。關于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，運用*流速。對內徑為4.6 mm的色譜柱，流速一般挑選1ml/min，關于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當選用*流速時，剖析時刻或許延伸。可選用改變活動相的洗刷強度的辦法以縮短剖析時刻（如反相柱時，可適當添加甲醇或乙腈的含量）。
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留意：
1）.因為甲醇的廉價，關于反相柱推薦運用甲醇體系（有必要運用乙腈的在外）。
2）.關于正相柱推薦運用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的乙烷做活動相，沒有提純的乙烷不的運用。用水運用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質，有或許影響剖析的成果。
3）.含水活動相在試驗前制造，尤其是夏天運用緩沖溶液作為活動相不要過夜。加入*，避免細菌的生長。
4）.活動相要求運用0.45um濾膜過濾，除掉微粒雜質。
5）.運用HPLC級溶劑裝備活動相，運用合適的活動相可延伸色譜柱的運用壽命，提高柱功用。
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4????????柱功用的測驗：
——啟動液相色譜儀：a. 活動相流速設定為1ml/min。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? b．UV檢測器波長設定為254nm。
——運用出廠測驗時運用的活動相組成及測驗樣品。
——記錄并計算測驗成果。
我公司業務范圍：
1、幫助您建立色譜剖析室及色譜剖析辦法、訓練色譜操作人員.
2、銷售各類進口、國產剖析儀器及有關配件、標樣、試劑。
3、氣相色譜儀、液相色譜儀、紫外分光光度計、原子吸收分光光度計等各類剖析儀器的裝置調試、功用改善、維護修補。
4、對外承接樣品剖析檢測任務，給出性檢測報告。
